Préparation et isolement de spores de Streptomyces venezuelae à partir d’une culture liquide

Commencez avec un flacon contenant une source et rempli d’un milieu riche en nutriments qui soutient le cycle de vie complet de la bactérie Streptomyces venezuelae .

Inoculez les spores bactériennes dans le milieu et incubez en secouant pour assurer une bonne aération et une bonne distribution des nutriments.

Le ressort améliore le mélange, favorisant une croissance uniforme et constante.

Les spores absorbent les nutriments et germent, produisant des tubes germinaux qui s’étendent à leurs extrémités, se ramifient en hyphes et se développent en une structure mycélienne.

Au fur et à mesure que les nutriments deviennent limités, l’organisme produit des hyphes sporogéniques spéciaux qui se divisent et produisent des spores, des cellules reproductrices dormantes.

Observez au microscope à contraste de phase pour confirmer la présence de fragments et de spores mycéliens.

Centrifugez la culture pour granuler les débris mycéliens les plus lourds, en laissant des spores plus légères dans le surnageant.

Transférez le surnageant dans un microtube et placez-le sur de la glace pour éviter une germination prématurée.

Diluez la suspension de spores dans un milieu frais et conservez-la dans des conditions froides jusqu’à nouvel ordre.

Inoculer 30 millilitres de milieu de croissance complété avec 10 microlitres de spores de la souche S. venezuela à imager. Pour une croissance et une sporulation constantes des cellules, utilisez un flacon à chicanes ou un ballon contenant un ressort pour permettre une aération suffisante.

Cultivez les cellules pendant 35 à 40 heures à 30 degrés Celsius et 250 tr/min. Lorsque vous êtes prêt, vous devriez être en mesure de voir les fragments et les spores mycéliens via la microscopie à contraste de phase montée en liquide. Centrifugez un millilitre de la culture dans une centrifugeuse de table à 400 fois G pendant une minute pour granuler le mycélium et les plus gros fragments cellulaires.

Transférez ensuite environ 300 microlitres de surnageant contenant une suspension de spores dans un nouveau tube de 1,5 millimètre et placez le tube sur de la glace.