Imagerie par fluorescence du cycle de vie de Streptomyces venezuelae

Prenez une plaque microfluidique avec un puits contenant des spores de Streptomyces venezuelae, une bactérie formant des hyphes.

D’autres puits désignés contiennent soit du milieu riche en nutriments, soit du milieu épuisé.

Les spores sont dérivées d’une souche exprimant les protéines fluorescentes DivIVA et FtsZ, qui se localisent respectivement aux extrémités des hyphes et aux parois transversales.

Appliquez de l’huile d’immersion sur l’objectif d’un microscope inversé et sur la fenêtre d’imagerie de la plaque.

Montez la plaque sur la platine du microscope et commencez l’imagerie en accéléré.

Chargez les spores dans la chambre de culture de la plaque.

Ensuite, introduisez le milieu riche en nutriments pour initier la germination des spores.

Au fur et à mesure que les hyphes grandissent, DivIVA s’accumule aux extrémités des hyphes, tandis que FtsZ forme des anneaux dispersés aux parois transversales.

Ensuite, passez au support usé. Le manque de nutriments dans ce milieu favorise la sporulation.

Dans les hyphes en germination, les foyers DivIVA disparaissent et FtsZ se réorganise en une échelle régulière d’anneaux de division, formant des septa de sporulation.

Au fil du temps, la disparition