Surveillance de l’infection bactérienne et de l’administration de protéines effectrices dans les cellules végétales

Commençons par une plante expérimentale avec des régions foliaires génétiquement modifiées exprimant de gros fragments non fluorescents de la protéine fluorescente verte superfolder ou sfGFP.

Injectez dans ces zones modifiées des bactéries Pseudomonas contenant des protéines effectrices marquées avec le petit fragment non fluorescent de sfGFP.

Incuber pour permettre l’interaction entre les bactéries et les cellules des feuilles.

À l’aide d’un système de sécrétion spécialisé, Pseudomonas délivre les protéines effectrices marquées dans le cytosol de la feuille.

La proximité entre les grands et les petits fragments de GFP permet leur assemblage en sfGFP fluorescente fonctionnelle, qui se déplace ensuite vers la membrane plasmique.

Après l’incubation, excisez les disques foliaires des zones injectées.

Visualisez ces disques à l’aide d’un microscope confocal à balayage laser.

Dans un premier temps, imagez le disque foliaire à faible intensité laser pour minimiser l’autofluorescence. Ensuite, augmentez la puissance du laser pour améliorer la visibilité.

La fluorescence verte confirme le succès de l’infection bactérienne et de l’administration de protéines effectrices dans les cellules végétales.