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Prenez une lamelle avec une couche d’hydrogel photodégradable qui contient des colonies bactériennes piégées, génétiquement modifiées pour émettre de la fluorescence.
Placez la lamelle dans un support.
Ajouter du milieu pour éviter la déshydratation de l’échantillon.
Sous un microscope à fond clair, concentrez-vous sur une seule colonie d’intérêt.
À l’aide d’un logiciel approprié, concevez un motif lumineux pour l’extraction des cellules à la périphérie de la colonie afin de briser les liaisons structurelles de l’hydrogel et de minimiser l’exposition aux UV des cellules.
Ajustez l’intensité de la lumière UV et la durée d’exposition.
Initier l’exposition à la lumière UV pour rompre les liaisons structurelles dans l’hydrogel aux zones exposées qui facilitent la libération de la colonie cible.
À l’aide d’un filtre à fluorescence, identifiez la colonie.
Placez un embout de tube à l’endroit, avec l’autre extrémité reliée à une seringue.
Passez en mode fond clair et, à l’aide de la seringue, aspirez la colonie libérée.
Transférez la colonie dans un tube pour une analyse plus approfondie.
Placez l’échantillon dans un support PDMS et ajoutez le milieu défini sur l’échantillon pour éviter la déshydratation de l’échantillon et fournir une solution de support pour les cellules libérées. Après avoir mis le miroir d’étalonnage en position, ajustez la mise au point du microscope pour obtenir une image nette des colonies à l’intérieur du réseau d’hydrogel ou de micropuits et inspectez-le pour identifier les colonies ou les puits d’intérêt.
Ici, concevez les motifs lumineux tandis que la vue de la caméra montre les colonies à l’intérieur de l’échantillon pour tester différents motifs pour l’extraction de cellules et enregistrer le motif défini. Sélectionnez ensuite la section de contrôle de session, ajoutez la séquence enregistrée sous l’onglet intitulé avec le nom du produit de l’outil d’éclairage à motifs. Choisissez l’option permettant de stimuler le motif pour visualiser et ajuster l’emplacement d’exposition souhaité.
Ensuite, réglez l’intensité lumineuse à 60 % et le temps d’exposition à 40 secondes sous l’onglet de contrôle LED et lancez le processus d’exposition. Surveillez la dégradation de l’hydrogel en temps réel et en mode Fond clair pour assurer la libération de la cellule. Pour prélever la cellule libérée, changez le filtre du microscope de Brightfield à TRITC pour visualiser la zone exposée de l’échantillon à l’œil nu.
Une fois la zone exposée localisée, placez l’extrémité du tube sur le point irradié, puis remplacez le filtre du microscope en fond clair pour surveiller la récupération des cellules en temps réel. À l’aide de la seringue fixée à l’autre extrémité du tube, prélever soigneusement 200 microlitres de solution contenant les cellules libérées et transférer la solution dans un tube à centrifuger de 1,5 millimètre pour l’analyse de l’ADN ou le placage