Essai de coincubation pour l’étude des interactions compétitives entre souches bactériennes

Commençons avec deux souches bactériennes, une de référence et une compétitrice, chacune exprimant un marqueur fluorescent distinct pour l’identification de la souche.

Mélangez les souches dans des proportions égales et placez le mélange sur une plaque de gélose.

Incuber la plaque pour permettre aux souches de pousser et d’interagir.

Le concurrent surpasse la souche de référence par des mécanismes dépendants ou indépendants du contact.

Dans la compétition dépendante du contact, le compétiteur utilise des systèmes de sécrétion spécialisés pour délivrer des toxines directement dans la souche de référence.

Dans une compétition indépendante du contact, le compétiteur libère des toxines qui se diffusent dans le milieu environnant et pénètrent dans la souche de référence.

Ces toxines perturbent les processus essentiels de la souche de référence, notamment la synthèse de la paroi cellulaire, la réplication de l’ADN et la synthèse des protéines, entraînant un arrêt de la croissance, la mort cellulaire et une réduction de l’expression de la fluorescence.

Après l’incubation, examinez la plaque au microscope à fluorescence.

Une fluorescence réduite dans la souche de référence, par rapport à la fluorescence plus brillante du concurrent, indique des interactions compétitives.

Pour mélanger la souche de référence et la souche concurrente dans un rapport de un à un, ajoutez 100 microlitres de chaque souche normalisée à OD 1,0 dans un tube à centrifuger de 1,5 millilitre étiqueté et vortex pendant une à deux secondes. Comme contrôle, mélangez la souche de référence avec une version d’elle-même étiquetée différentiellement et vortex également.

Il est essentiel d’obtenir le bon rapport de départ, car il peut considérablement modifier le résultat de l’expérience. Pour garantir le succès, cette étape peut nécessiter une optimisation pour une espèce bactérienne donnée. Après avoir répété cette étape pour chaque répétition biologique, il devrait y avoir quatre répétitions biologiques avec des souches de référence marquées différentiellement comme témoins et quatre répétitions biologiques avec des souches de référence et des souches concurrentes marquées différentiellement.

Pour faire des taches de culture qui seront utilisées pour la microscopie à fluorescence après l’incubation, ajoutez 10 microlitres de chaque mélange témoin et expérimental sur une plaque de Pétri contenant de la gélose LBS. Une fois que les taches ont complètement séché sur le banc, incubez les plaques à 24 degrés Celsius pendant 24 heures.