Modélisation de la colonisation vaginale murine par des bactéries anaérobies

Prenez une souris femelle traitée avec une hormone qui conditionne l’environnement vaginal, augmentant ainsi sa sensibilité aux infections.

Soulevez la souris par sa queue pendant qu’elle saisit la cage avec ses pattes avant pour élever les postérieurs et exposer l’ouverture vaginale.

Rincez la lumière vaginale avec un tampon anaérobie pour éliminer le mucus, une barrière protectrice contre les agents pathogènes, ainsi que les cellules épithéliales mortes et les microbes vaginaux endogènes.

Inoculez immédiatement le vagin avec une suspension d’un agent pathogène bactérien anaérobie, tout en gardant la souris immobilisée pour minimiser la perte de liquide.

Pour la co-inoculation, administrer une suspension d’un autre agent pathogène bactérien anaérobie en utilisant le même volume que précédemment.

Hébergez la souris inoculée séparément des souris non inoculées pour éviter la contamination croisée.

Après l’inoculation, les bactéries adhèrent à l’épithélium vaginal, se développent en colonies et développent une couche protectrice de biofilm qui agit comme une barrière contre les réponses immunitaires de l’hôte.

Préparez les tubes de lavage vaginal dans la chambre anaérobie en pipetant 70 microlitres de PBS anaérobie stérile dans des tubes microcentrifuges de 1,5 millilitre marqués avec des numéros de souris.

Fermez bien les tubes et sortez-les de la chambre. Pour effectuer un lavage vaginal, placez d’abord une souris sur une cage qu’elle peut saisir avec ses pattes avant. Ensuite, saisissez doucement la partie centrale de la queue et soulevez-la de manière à ce que les membres postérieurs soient légèrement surélevés et que l’ouverture vaginale soit exposée.

Après avoir prélevé 50 microlitres de PBS dans le tube de lavage étiqueté, insérez doucement la pointe de la pipette à deux ou trois millimètres dans la lumière vaginale pour la laver avec du PBS en pipetant trois à quatre fois vers l’intérieur et vers l’extérieur. Ensuite, transférez le matériau de lavage dans le tube de lavage d’origine avec les 20 microlitres restants de PBS inutilisés. Immédiatement après ce lavage vaginal, inoculez chaque souris en transférant par voie vaginale 20 microlitres de la suspension bactérienne ou du contrôle du véhicule.

Pour les expériences de co-inoculation avec deux souches bactériennes différentes, inoculez séparément 10 microlitres de chaque suspension bactérienne, plutôt que de mélanger les souches au préalable. Pour éviter que le volume administré ne s’accumule immédiatement au niveau de l’introït vaginal, continuez à tenir la partie postérieure de la souris pendant 10 à 20 secondes. Transférez la souris inoculée dans une nouvelle cage ou avec des compagnons de cage déjà inoculés, et répétez la procédure avec les autres souris.