Essai d’inondation des semis pour le dépistage de la résistance bactérienne des tomates

Pour dépister la résistance bactérienne dans différentes souches de tomates, commencez par des plants de tomates âgés de 10 jours cultivés dans des conditions stériles.

Ces semis présentent de vraies feuilles émergentes et des racines établies.

Inondez les deux souches de bactéries pathogènes mélangées à un tensioactif pour faciliter la propagation uniforme de l’inoculum à la surface de la plante. Inclinez et agitez la plaque pour maximiser le contact des plantules avec l’inoculum.

Retirez l’excès d’inoculum, refermez les plaques et incubez-les dans une chambre de croissance.

Les bactéries pénètrent par les stomates et colonisent l’apoplaste, l’espace extracellulaire entre les cellules des feuilles.

Les bactéries injectent des protéines effectrices dans les cellules végétales pour supprimer les réponses immunitaires des plantes.

Les souches sensibles ne parviennent pas à détecter ces effecteurs, ce qui permet la prolifération bactérienne et les dommages aux tissus végétaux induits par les toxines bactériennes.

Les souches résistantes reconnaissent les effecteurs et produisent des espèces réactives de l’oxygène pour tuer les bactéries.

Après l’incubation, les souches résistantes présentent une croissance soutenue, tandis que les souches sensibles présentent un arrêt du développement.

Transférez les plaques contenant les plants de dix jours de la chambre de croissance à l’armoire de biosécurité et retirez le ruban chirurgical. Transférez ensuite six millilitres d’inoculum dans chaque plaque.

Poussez doucement les plantules dans l’inoculum à l’aide d’une pointe de pipette et démarrez une minuterie pendant trois minutes. Tenez une assiette dans chaque main et inclinez l’avant de l’assiette vers le bas pour immerger les cotylédons et les feuilles des semis. Agitez l’inoculum d’un côté à l’autre cinq à sept fois, puis inclinez les plaques vers l’arrière pour couvrir les racines avec l’inoculum.

Inclinez à nouveau les plaques vers le bas et répétez le cycle pendant un total de trois minutes. Versez l’inoculum des plaques, posez-les sur une surface plane et videz toute inoculum résiduelle une deuxième fois. Réemballez les plaques et remettez-les dans la chambre de croissance.