Livraison localisée de bactéries dans la lumière intestinale d’une larve de poisson-zèbre par micro-injection

Prenez une coupelle contenant une larve de poisson-zèbre anesthésiée.

Appliquez une goutte d’agarose à faible point de fusion sur la larve et positionnez-la doucement latéralement pour permettre l’accès intestinal pendant l’injection.

Maintenant, refroidissez brièvement l’agarose pour la solidifier, immobilisant ainsi la larve.

Ajouter un milieu contenant un agent anesthésique pour maintenir la larve sous anesthésie.

Ensuite, prenez une suspension de Clostridioides difficile marquée par fluorescence, une bactérie pathogène, et ajoutez un colorant traceur pour faciliter le suivi de l’injection.

Chargez ce mélange dans une aiguille de micro-injection et montez l’aiguille sur un micromanipulateur.

Sous un stéréomicroscope, positionnez l’aiguille à un angle dirigé vers l’intestin larvaire.

Ensuite, insérez doucement la pointe de l’aiguille dans la lumière intestinale.

Injectez les bactéries directement dans la lumière et confirmez la réussite de l’accouchement à l’aide du colorant traceur. Ensuite, rétractez l’aiguille.

À l’aide de la microscopie à fluorescence, confirmer la localisation de Clostridioides difficile dans l’intestin larvaire.

Tout d’abord, placez une goutte d’agarose à faible poin