Isolement et culture de bactéries Clostridioides difficile à partir de larves d’intestin de poisson-zèbre

Commençons par une larve de poisson-zèbre euthanasiée avec un intestin infecté par Clostridioides difficile, une bactérie anaérobie pathogène.

Fixez la partie supérieure du tronc dorsal de la larve et retirez sa tête pour exposer les organes internes.

Fixez le tronc médio-dorsal et isolez doucement l’intestin de la cavité corporelle.

Transférez l’intestin isolé dans un tube de microcentrifugation contenant un tampon.

Homogénéiser l’intestin à l’aide d’un pilon pour perturber les tissus et libérer les microbes intestinaux.

Transvasez l’homogénat dans un tube contenant des milieux d’élevage sélectifs complétés par des antibiotiques.

Incuber l’homogénat dans une chambre anaérobie.

Les conditions anaérobies inhibent la croissance des bactéries aérobies, tandis que les antibiotiques ciblent et suppriment spécifiquement la croissance des microbes intestinaux anaérobies natifs.

Clostridioides difficile résiste à ces antibiotiques et prolifère dans des conditions anaérobies.

Les nutriments et les facteurs de croissance dans le milieu d’élevage favorisent davantage la division cellulaire, permettant la croissance de Clostridioides difficile viables.

Après avoir euthanasié les larves de poisson-zèbre