JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologie
0 vues • 2:45 min • September 26th, 2025
Prenez des puces microfluidiques avec des chambres de croissance et de médicament séparées par une valve micromécanique.
Chargez des souches mutantes d’E. coli de type sauvage et résistantes au TMP, en suspension dans un milieu, dans les chambres de croissance à l’aide d’une pression, où le triméthoprime (TMP) est l’antibiotique testé.
Ensuite, chargez les chambres médicamenteuses avec des milieux contenant une faible concentration de TMP pour induire un stress cellulaire chez les bactéries.
Actionnez la valve micromécanique pour permettre la diffusion du TMP dans les chambres de croissance, permettant ainsi l’entrée du TMP dans les bactéries.
Placez les puces dans l’incubateur monté sur la platine du microscope inversé et lancez l’imagerie en accéléré.
Chez E. coli de type sauvage, le TMP se lie à l’enzyme dihydrofolate réductase, empêchant la liaison du dihydrofolate et provoquant une filamentation induite par le stress et une multiplication bactérienne réduite.
Cependant, la structure DHFR altérée de la souche mutante empêche la liaison du TMP, permettant une multiplication normale.
Observez les images en accéléré.
La souche E . coli de type sauvage présente une filamentation et une multiplication réduite sous traitement TMP, tandis que la souche mutante présente une morphologie et une multiplication normales, indiquant une résistance aux antibiotiques.
Après avoir décongelé l’échantillon congelé quotidien à température ambiante pendant cinq minutes, inoculez un nouveau tube à essai avec un milieu M9 frais.
Placez l’échantillon dans un incubateur à 37 degrés Celsius pendant la nuit. Le lendemain, utilisez le milieu M9 pour diluer l’échantillon microbien dix fois et chargez-le dans le dispositif microfluidique en pressant le récipient d’échantillon microbien à cinq PSI. Ensuite, chargez le milieu contenant le TMP dans la puce en pressant le M9 avec le conteneur TMP à cinq PSI.
Exécutez le mélange entre le microbe et le médicament en actionnant la valve micromécanique entre les deux chambres de la puce microfluidique pendant 15 minutes. Enfin, placez la puce microfluidique dans l’incubateur de microscope monté sur le microscope inversé. Avec une caméra CCD, acquérez des images cellulaires dans la chambre de croissance toutes les heures pendant huit heures.
Calculez les données du numéro de cellule selon le protocole texte.