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Microbiologie
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Commencez par une culture liquide de Sporosarcina pasteurii dans un milieu riche en nutriments.
Prenez une solution mère d’enrichissement contenant de l’urée, du chlorure de calcium, du chlorure d’ammonium et du bicarbonate de sodium.
Ajouter une partie du milieu d’enrichissement dans le tube de culture bactérienne.
Vortex les tubes pour mélanger uniformément les cellules bactériennes et les nutriments.
Incuber les cultures enrichies dans un incubateur non agité.
Sporosarcina pasteurii, une bactérie du sol à Gram positif, produit l’enzyme uréase en présence d’urée.
L’uréase décompose l’urée en ions ammonium et carbonate.
Le chlorure d’ammonium et le bicarbonate de sodium aident à maintenir un pH alcalin qui favorise la précipitation des minéraux.
Les ions carbonate réagissent avec les ions calcium du chlorure de calcium pour former du carbonate de calcium insoluble.
Ce précipité commence à se former autour des cellules bactériennes et se cristallise en calcite, une forme cristalline stable.
Ces cristaux se déposent sous forme de dépôts blancs au fond du tube, démontrant une précipitation de calcite induite par des microbénéfices, ou MICP.
Transférez neuf millilitres de la culture liquide préparée dans plusieurs tubes à centrifuger stérilisés de dix millilitres. Préparez 100 millilitres de la solution mère d’enrichissement externe à l’aide d’une balance analytique pour mesurer soigneusement deux grammes par litre d’urée, un gramme par litre de chlorure d’ammonium, 212 milligrammes par litre de bicarbonate de sodium et 280 milligrammes par litre de chlorure de calcium.
Dans un bécher avec du milieu frais, mélangez tous les ingrédients sauf l’urée et l’autoclave. Après l’autoclavage, mélangez l’urée avec un millilitre de milieu frais et passez la solution dans une seringue équipée d’un filtre de 0,2 micromètre avant de l’ajouter au milieu d’enrichissement. Ajoutez un millilitre de milieu d’enrichissement avec des additifs dans les tubes à centrifuger stérilisés contenant neuf millilitres de la culture préparée.
Vortex chaque tube et incuber dans un incubateur sans secousses à 30 degrés Celsius. Surveiller régulièrement toutes les unités pour détecter l’initiation des précipitations.