Identification à haut débit de polymères répulsifs contre les bactéries par criblage de microréseaux

Placez une lame de microréseau stérilisée, recouverte d’agarose, avec plusieurs points de polymère dans une plaque multipuits. L’agarose minimise la liaison bactérienne non spécifique.

Ajoutez une culture bactérienne mixte à la lame et incubez-la en agitant doucement.

Les bactéries sécrètent des protéines d’adhésion distinctes qui se lient à des points favorables aux polymères, ce qui entraîne une fixation et une colonisation bactériennes plus fortes au fil du temps.

À l’inverse, les polymères répulsifs résistent à l’adsorption des protéines et réduisent la fixation bactérienne.

Rincez la lame avec une solution saline tamponnée au phosphate ou PBS pour éliminer les bactéries faiblement liées.

Ajoutez du DAPI pour colorer l’ADN des bactéries attachées à la surface.

Lavez la diapositive avec du PBS, séchez-la et scellez-la avec une lamelle adhésive.

Stérilisez la surface extérieure de la lame avec de l’éthanol.

Capturez des images en fond clair pour localiser les taches de polymère. Ensuite, passez en mode fluorescence pour détecter la fluorescence sur les taches de polymère.

Les taches de polymère qui présentent une fluorescence réduite indiquent une fixation bactérienne minimale et sont identifiées comme des polymères répulsifs contre les bactéries.

Après la culture et la préparation de l’inoculum pour les microréseaux, conformément au protocole de texte, placez les microréseaux de polymères stérilisés aux UV dans des plaques rectangulaires à quatre puits et ajoutez six millilitres de cultures bactériennes mixtes. Incuber les plaques à 37 degrés Celsius en agitant doucement pendant cinq jours. Après l’incubation, utilisez du PBS pour rincer doucement les microréseaux deux fois.

Ajoutez ensuite un microgramme par millilitre de DAPI dans du PBS et incubez pendant 30 minutes. Ensuite, transférez les microréseaux dans une nouvelle plaque à quatre puits, couvrez les microréseaux de PBS puis agitez doucement. Ensuite, changez le PBS une fois et répétez le lavage.

Après le rinçage, séchez les microréseaux sous un courant d’air, puis appliquez un film d’étanchéité et fixez des lamelles en verre sur les lames des microréseaux. Lorsque la colle est sèche, utilisez de l’éthanol à 70 % pour stériliser la surface extérieure. À l’aide d’un microscope à fluorescence, équipé d’un capteur subjectif 20x, capturez des images uniques pour chaque point polymère en fond clair et dans les canaux DAPI.