Préparation de l’inoculum bioluminescent entérohémorragique d’Escherichia coli

Commencez par un stock congelé d’Escherichia coli entérohémorragique ou ECEH, une bactérie intestinale pathogène.

Ces bactéries portent un plasmide qui exprime la luciférase pour l’imagerie bioluminescente en temps réel et un gène de résistance aux antibiotiques pour la sélection.

Étalez les bactéries sur une plaque de gélose contenant l’antibiotique approprié et incubez pour isoler les colonies individuelles portant des plasmides.

Choisissez une seule colonie et cultivez-la dans un bouillon supplémenté en antibiotiques. Incuber pour propager une population génétiquement uniforme et stable au plasmide.

Étendre la culture dans des conditions aérées pour synchroniser les cellules en croissance logarithmique.

Surveillez la croissance bactérienne jusqu’à ce que la densité optique souhaitée soit atteinte.

Ensuite, centrifugez la culture pour granuler les bactéries.

Retirez le surnageant et lavez la pastille avec une solution saline stérile.

Centrifuger à nouveau. Jetez le surnageant et remettez la pastille en suspension dans un plus petit volume de solution saline.

Cette suspension EHEC concentrée est maintenant prête pour le suivi basé sur la bioluminescence.

Pour commencer, étalez un stock de m