Préparation des sphéroplastes d’E. coli
Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 4:30 min • September 26th, 2025
Prenez une culture d’E. coli .
Diluez la culture dans un milieu frais et incubez-la pour favoriser la division bactérienne.
Ensuite, diluez la culture dans un milieu contenant un inhibiteur de division bactérienne et incubez.
Les bactéries continuent de croître sans se diviser, formant des filaments allongés.
Transférez la culture dans un tube frais, puis centrifugez-la pour granuler les filaments et retirer le surnageant.
Lavez le granulé avec un stabilisateur osmotique pour éviter la lyse du sphéroplaste. Retirez la solution.
Ajoutez du tampon, du lysozyme, de la DNase et un agent chélateur séquentiellement. Couver.
L’agent chélateur déstabilise la membrane externe du filament.
Le lysozyme dégrade la couche de peptidoglycane exposée, ce qui fait perdre la forme des filaments et former des structures sphériques appelées sphéroplastes.
De plus, la DNase dégrade l’ADN contaminant libéré par les filaments endommagés.
Ajoutez à nouveau le stabilisateur osmotique, mélangez et incuberez.
Transférez la suspension dans un tube contenant un tampon et une centrifugeuse.
Éliminer l’excès de surnageant et remettre les sphéroplastes en suspension dans le tampon pour l’analyse en aval.
Pour mettre en place
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