Évaluation de la transcytose d’E. coli à travers les monocouches épithéliales intestinales

Commencez par une culture d’E. coli isolée chez des nouveau-nés atteints d’infections sanguines.

Centrifugez pour granuler les bactéries, jetez le surnageant et remettez la pastille en suspension dans un milieu sans antibiotique.

Prenez une plaque avec un insert transwell contenant une monocouche de cellules épithéliales intestinales.

Mesurez la résistance électrique à travers la couche cellulaire à l’aide d’une sonde pour confirmer l’intégrité de la monocouche.

Ajoutez la suspension bactérienne dans l’insert et incubez.

Les bactéries adhèrent aux cellules épithéliales, sont internalisées dans les vésicules et sont transportées à travers les cellules jusqu’au puits inférieur via un processus appelé transcytose.

Mesurez à nouveau la résistance électrique ; Une valeur stable confirme une monocouche intacte lors de la transcytose.

Transférez l’insert dans un puits frais et récupérez le milieu du puits inférieur précédent.

Placez le milieu collecté sur une plaque de gélose et incubez pour développer les colonies bactériennes.

Comptez les colonies pour déterminer l’étendue de la transcytose d’E. coli à travers la barrière épithéliale intestinale.

Toutes les 30 minutes après l’inoculation, remplis