Préparation et induction de cultures de Borrelia burgdorferi pour la production de particules virales
Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:17 min • September 26th, 2025
Commencer par une culture d’une souche génétiquement modifiée de Borrelia burgdorferi, une bactérie pathogène.
Cette souche porte de l’ADN bactériophage dormant intégré dans son génome, qui a été conçu pour inclure un gène cible conférant une résistance aux antibiotiques.
Ajoutez l’antibiotique correspondant et incubez la culture. Le gène de résistance aux antibiotiques exprime une protéine qui inhibe l’antibiotique, garantissant que seules les bactéries hébergeant le gène prolifèrent.
Une fois que la culture atteint la densité souhaitée, centrifugez les cellules pour les granuler et jetez le surnageant.
Remettez la pastille en suspension, introduisez un inducteur chimique et incubez pour induire des dommages à l’ADN.
La réponse de réparation de l’ADN qui en résulte excise l’ADN du bactériophage, initiant sa réplication, l’expression de protéines structurelles et l’assemblage de nouveaux virions porteurs du gène de résistance aux antibiotiques.
Centrifugez à nouveau la culture, jetez le surnageant et remettez les cellules en suspension dans un milieu frais.
Les cellules bactériennes contenant des virions matures sont prêtes pour d’autres applications en aval.
Inoculer 150 microlitres du cl
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