Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:35 min • September 26th, 2025
Commencez par une lame de verre chambrée recouverte d’une membrane supportée composée de phospholipides, y compris des phospholipides biotinylés.
Incuber avec de la neutravidine, qui se lie à la biotine sur la bicouche. Lavez pour enlever l’excès de neutravidine.
Introduisez un milieu nutritif contenant des vésicules géantes ou GV. Chaque GV est une vésicule bicouche lipidique sphérique de la taille d’un micron qui encapsule une seule cellule bactérienne, servant de modèle pour étudier le comportement cellulaire individuel dans un environnement confiné.
La neutravidine se lie aux lipides biotinylés du GV, fixant les vésicules à la membrane supportée pour une observation stable à long terme dans des conditions statiques.
Scellez la chambre pour maintenir l’hydratation et minimiser la contamination.
Placez la lame sur une platine de microscope équipée d’une plate-forme chauffante pour simuler les conditions physiologiques et observez au microscope.
Les nutriments du milieu se diffusent dans le GV pour favoriser la croissance bactérienne au fil du temps.
Cette configuration permet de visualiser en temps réel la croissance bactérienne unicellulaire dans des microenvironnements de vésicules confinés.
Pour immobiliser les vésicules géantes sur la membrane bicouche de support, introduisez 10 microlitres de neutravidine dans une solution aqueuse de vésicule géante externe dans le trou pour une incubation de 15 minutes à température ambiante.
À la fin de l’incubation, lavez doucement le trou deux fois avec 20 microlitres de milieu LB, complété par 200 millimolaires de glucose, et ajoutez tout le volume de solution de vésicule géante dans le trou de la chambre. Scellez ensuite le trou avec un verre de couverture de 18 x 18 millimètres. Pour surveiller la croissance bactérienne à l’intérieur des vésicules géantes, sélectionnez l’objectif 40X sur un microscope inversé et placez la chambre sur le système de platine de chauffage du microscope.
Ensuite, incubez les vésicules géantes contenant des cellules bactériennes dans la chambre dans des conditions statiques pendant six heures à 37 degrés Celsius, en capturant et en enregistrant des images de la croissance des cellules bactériennes toutes les 30 minutes, avec la caméra scientifique à semi-conducteurs à oxyde métallique.