Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:41 min • September 26th, 2025
Commencez par une pastille bactérienne. Les bactéries contiennent un gène codant pour une protéine initiatrice, mais n’ont pas de gène de résistance aux antibiotiques.
Remettez la pastille en suspension dans de l’eau glacée pour minimiser la dégradation cellulaire.
Prenez un plasmide porteur d’un gène de résistance aux antibiotiques et d’un gène cible. Ce plasmide est appelé plasmide suicide car il ne peut pas se répliquer sans la protéine initiatrice.
Ajouter le plasmide à la suspension bactérienne.
Transférez la suspension dans une cuvette réfrigérée.
Amorcez l’électroporation en appliquant une impulsion à haute tension qui perturbe transitoirement la membrane bactérienne, permettant au plasmide d’entrer.
Ajoutez du milieu de récupération et transférez le mélange dans un tube de culture.
Incuber en secouant.
Prenez une plaque de gélose contenant l’antibiotique et mettez la culture en plaque.
La protéine initiatrice bactérienne se lie à l’origine de la réplication, permettant au plasmide de se répliquer et d’exprimer une protéine de résistance aux antibiotiques.
Cela permet aux bactéries avec le plasmide de survivre et de se développer, facilitant l’amplification du plasmide.
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