Absorption de l’ADN induite par la compétence chez Staphylococcus aureus
Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:13 min • September 26th, 2025
Prenez une culture de S. aureus sensible à l’antibiotique chloramphénicol.
Centrifuger pour granuler les bactéries et éliminer le surnageant.
Transférez la pastille dans un tube contenant un milieu limitant les nutriments et incuber. Le stress nutritionnel améliore la compétence de la bactérie à internaliser l’ADN étranger.
Centrifugez à nouveau et retirez le surnageant. Remettre le granulé en suspension dans un milieu frais limitant les nutriments.
Ensuite, ajoutez de l’ADN extrait d’une souche de S. aureus portant un gène résistant au chloramphénicol. Couver.
La machinerie d’absorption de l’ADN traite l’ADN en un seul brin et le transfère dans le cytoplasme, où il s’intègre dans le chromosome bactérien.
Centrifugez et retirez le surnageant. Remettez le granulé en suspension dans un milieu riche en nutriments.
Transférez la suspension dans une gélose fondue riche en nutriments contenant du chloramphénicol.
Versez le mélange dans un plat et incubez.
La croissance de colonies résistantes au chloramphénicol indique une absorption réussie de l’ADN.
Cultivez la cellule réceptrice pendant la nuit, dans cinq millilitres de TSB à 37 degrés Celsius en agitant. Le lendemain matin, transférez 0,5 mill
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