Un test liquide multipuits pour le dépistage des renversements de C. elegans

Prenez une plaque multi-puits contenant un milieu gélosé pré-repéré avec des bactéries ARNi, avec ou sans insert spécifique au gène ciblant un gène de C. elegans .

Grainez des vers synchronisés de stade L1 dans les puits et incubez-les pour permettre de se nourrir des bactéries ARNi.

L’insert produit un ARN interférent qui cible des gènes spécifiques du ver, générant un phénotype d’inactivation spécifique au gène.

Ajoutez un tampon dans les puits et remettez doucement les vers en suspension.

Transférez la suspension dans une plaque à puits profond et laissez les vers se déposer par gravité.

Retirez le surnageant en conservant un peu de tampon.

Lavez les vers avec un tampon, puis jetez le surnageant en laissant une petite quantité de tampon.

Ensuite, prenez une plaque de dosage multi-puits contenant des bactéries pathogènes.

Distribuez un nombre défini de vers témoins et renversants dans leurs puits respectifs pour permettre les interactions hôte-pathogène. Les bactéries pathogènes sécrètent des composés qui induisent la mortalité des vers.

Comparez la mortalité des vers pour évaluer l’effet de l’inactivation spécifique d’un gène sur la survie des vers.

Ajouter un millilitre de S Basal par pu