Culture et entretien de bactéries exprimant l’ARNi
Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:29 min • September 26th, 2025
Commencez avec une plaque contenant des bactéries exprimant l’ARN interférence ou l’ARNi pré-cultivées.
Ces bactéries portent des plasmides contenant un gène de résistance aux antibiotiques et un insert de gène cible qui produit de l’ARN double brin ou ARNdb pour inhiber l’expression génique spécifique chez l’hôte.
À l’aide d’une épingle stérile, transférez les colonies dans une plaque à puits profond contenant un milieu supplémenté en antibiotiques.
Incuber la plaque en secouant pour une croissance bactérienne uniforme, où les puits profonds assurent l’aération.
L’antibiotique élimine les bactéries qui n’ont pas le plasmide, garantissant ainsi la survie de seules les bactéries porteuses de plasmides.
Centrifugez la plaque pour séparer les bactéries et jetez le surnageant.
Remettez les bactéries en suspension dans une solution saline tamponnée pour les stabiliser.
Distribuez les bactéries remises en suspension dans une plaque multi-puits contenant un milieu riche en nutriments complété à la fois par un antibiotique et un inducteur.
L’antibiotique sélectionne les bactéries porteuses de plasmides, tandis que l’inducteur déclenche l’expression de l’ARNdb.
La plaque ensemencée de bactéries expr
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