JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologie
0 vues • 2:08 min • September 26th, 2025
Prenez une assiette d’essaim dégradée avec de l’agar à double couche. La couche inférieure, contenant un inhibiteur, a été coulée pour créer un dégradé de l’inhibiteur.
La plaque contient des puits espacés isométriquement pour fournir un espace approprié pour l’essaimage bactérien ou la migration collective, évitant ainsi les chevauchements d’essaim.
Inoculer les puits avec une culture bactérienne et incuber la plaque.
Sous de faibles concentrations d’inhibiteurs, les bactéries coordonnent leur mouvement flagellaire, initiant la migration collective ou l’essaimage.
À des concentrations élevées d’inhibiteurs, l’inhibiteur supprime l’expression des gènes liés aux flagelles.
Il en résulte un mouvement flagellaire limité, conduisant à une motilité d’essaimage limitée.
Imagez la plaque sous une lumière blanche à intervalles réguliers pour capturer le motif d’essaimage.
Pendant l’imagerie, ajustez le temps d’exposition pour améliorer la luminosité des essaims.
Modifiez les paramètres de seuil pour minimiser les interférences de la lumière d’arrière-plan et augmenter le contraste.
Enregistrez l’image pour une analyse ultérieure de l’effet de la concentration de l’inhibiteur sur l’essaimage bactérien.
Ajoutez 80 microlitres de la culture de croissance de nuit dans chaque puits. Sortez les plaques d’essaim de l’incubateur une à une toutes les 12 heures et placez-les dans le système d’imagerie en gel.
Sélectionnez le mode d’imagerie gel, exposez la plaque d’essaim à la lumière blanche et ajustez la distance focale pour obtenir une vue claire des essaims. Améliorez la luminosité des essaims pour une observation précise en ajustant le temps d’exposition à 300 millisecondes. Ajustez le seuil pour minimiser les interférences de la lumière de fond.
Enregistrez le fichier image pour une analyse plus approfondie.