Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:50 min • September 26th, 2025
Commencez par une culture d’une espèce bactérienne qui code pour des protéines recombinantes marquées avec le peptide de nucléation des vésicules, ou VNp, un peptide court qui favorise la formation des vésicules.
Ajoutez un inducteur à la culture et incuber. L’inducteur déclenche l’expression des protéines.
VNp s’intègre dans la membrane interne et favorise la courbure de la membrane, encapsulant les protéines marquées par VNp dans des vésicules bourgeonnantes.
Transférez le milieu riche en vésicules dans un tube. Centrifugez-le pour séparer le surnageant riche en vésicules.
Ensuite, filtrez le surnageant pour éliminer les contaminants résiduels.
Ensuite, passez le filtrat à travers un autre filtre à membrane pour capturer les vésicules à la surface de la membrane.
Placez la membrane dans un plat et ajoutez une solution saline tamponnée au phosphate.
Détachez doucement les vésicules et transférez la suspension dans un tube propre.
Soniquer la suspension pour perturber les membranes des vésicules et libérer les protéines.
Centrifuger le lysat pour séparer les fragments de membrane.
Le surnageant résultant contient des protéines recombinantes purifiées, prêtes à être analysées.
Induire l’expres
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