F Transfert de plasmide et double sélection d’antibiotiques chez E. coli

Commençons par des cellules E. coli de donneur portant un plasmide F dans lequel un gène de transfert est remplacé par un gène de résistance aux antibiotiques.

Ces cellules contiennent également un plasmide de secours qui code pour le gène de transfert manquant.

Prenez des volumes égaux de cellules E . coli receveuses avec un gène de résistance aux antibiotiques différent dans leur ADN.

Mélangez les deux cultures dans un milieu nutritif sans antibiotiques et incubez sans agiter.

Le plasmide de secours de la bactérie donneuse exprime le gène de transfert, permettant à la cellule donneuse de construire un F-pilus.

Le pilus forme un pont entre deux cellules, permettant le transfert unidirectionnel de plasmides du donneur au receveur, formant des transconjugants.

Vortex le mélange pour perturber les couples d’accouplement et placez-le sur de la glace pour empêcher tout nouvel accouplement.

Repérez la culture sur des plaques de gélose contenant des antibiotiques transconjugaisables sélectionnables et incubez.

Les transconjugants, porteurs des deux gènes de résistance aux antibiotiques, survivent et forment des colonies en présence des deux antibiotiques, confirmant ainsi le transfert réussi du