Dosage par biocapteur bactérien pour la détection du mercure biodisponible dans des conditions anaérobies

Commencez par une configuration de test contenant des flacons placés à l’intérieur d’une chambre anaérobie.

Chaque flacon contient un milieu complété par du nitrate de sodium, des ions mercure et des concentrations variables de sulfate de magnésium.

Faites pivoter la configuration pour mélanger les composants, puis incuber.

Pendant l’incubation, le sulfate de magnésium favorise la formation de complexes de mercure non biodisponibles, réduisant les ions mercure libres et biodisponibles d’une manière dépendante de la concentration.

Ensuite, ajoutez des biocapteurs induits, des bactéries génétiquement modifiées portant un plasmide, et mélangez.

Le plasmide contient un régulateur transcriptionnel sensible au mercure et un promoteur lié à un gène rapporteur fluorescent.

Dans des conditions anaérobies, la bactérie utilise le nitrate pour respirer.

Les ions mercure libres pénètrent dans les cellules, se lient au régulateur transcriptionnel et activent le gène fluorescent, produisant des protéines fluorescentes.

Transférez les aliquotes de chaque flacon dans une plaque à plusieurs puits.

À l’aide d’un lecteur de plaques, mesurez l’intensité de la fluorescence.

Une diminution de la fluorescence avec