Inhibiteurs de criblage de la pyrophosphatase liée à la membrane bactérienne à l’aide d’un dosage colorimétrique

La pyrophosphatase liée à la membrane bactérienne, ou mPPase, hydrolyse la pyrophosphate en orthophosphate tout en pompant des ions sodium à travers la membrane.

Pour évaluer les effets inhibiteurs contre les mPPases, ajoutez des concentrations croissantes d’étalons de phosphate aux bandelettes de tubes.

Introduire des composés d’essai, qui peuvent inhiber la mPPase, dans des tubes, en laissant l’eau comme témoin.

Ajouter des mPPases intégrées dans des liposomes dérivées de la bactérie thermophile Thermotoga maritima dans tous les tubes, à l’exception des étalons.

Sceller et incuber à la température optimale pour activer l’enzyme.

Ajouter du pyrophosphate de sodium pour initier la réaction et libérer de l’orthophosphate.

Transférez les tubes sur une plate-forme de refroidissement pour arrêter la réaction et centrifugez-les pour éliminer la condensation.

Ajouter le réactif molybdate-ascorbate pour réagir avec l’orthophosphate et former l’acide phosphomolybdique.

Ajouter la solution d’arsénite-citrate pour réduire l’acide, formant un complexe bleu stable.

Transférez le contenu dans une plaque multipuits et mesurez l’absorbance.

Une absorbance plus faible par rapport au témoin indique une inhib