Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:15 min • October 30th, 2025
Prenez comme référence une lame contenant des spores bactériennes dormantes et des microsphères fluorescentes.
Les spores portent des rapporteurs fluorescents rouges et verts pour les protéines de germination, la membrane interne étant colorée à l’aide d’un colorant lipophile.
Montez la lame sur un microscope à éclairage structuré ou une carte SIM équipée d’un objectif à immersion dans l’huile.
Localisez les microsphères fluorescentes et ajustez la mise au point pour minimiser le flou de l’image.
Ensuite, utilisez la lumière transmise pour localiser les spores bactériennes.
Passez en mode SIM et illuminez les spores pour exciter les fluorophores.
Acquérez des images de fluorescence haute résolution sur toute la profondeur des spores.
Sur la membrane interne lipophile colorée par un colorant, les protéines de germination apparaissent sous forme de foyers rouges et verts distincts. Cela permet une cartographie précise de l’emplacement des protéines de germination dans les spores bactériennes.
Pour l’imagerie des échantillons, placez la lame sur un microscope à éclairage structuré équipé d’un objectif à huile 100X, et concentrez-vous sur les microsphères fluorescentes de 100 nanomètres.
Ajuste
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