Enrichissement de lipoprotéines bactériennes à l’aide d’une séparation de phase détergente non ionique

Prenez un lysat bactérien contenant des protéines hydrophiles, des lipoprotéines et des agrégats de protéines.

Ajoutez un détergent froid non ionique capable de séparer les phases à des températures plus chaudes.

Incuber sur glace et mélanger périodiquement. Le détergent se lie à la fraction lipidique de la lipoprotéine, formant des complexes protéine-détergent.

Réchauffez le mélange pour induire la séparation des phases. Les lipoprotéines se concentrent dans la phase détergente, tandis que les protéines hydrophiles restent dans la phase aqueuse.

Centrifuger à température ambiante pour maintenir la séparation biphasique.

Jetez la phase aqueuse, ajoutez un tampon froid à la phase détergente et mélangez.

Répétez le cycle de refroidissement, de réchauffement et de centrifugation pour enrichir les lipoprotéines.

Ensuite, ajoutez un tampon froid et centrifugez à basse température pour granuler les agrégats non lipoprotéiques.

Transférez le surnageant dans un tube contenant un solvant précipitant les protéines et incubez à une température inférieure à zéro pour précipiter les lipoprotéines.

Centrifuger à température ambiante et jeter le surnageant.

Les lipoprotéines précipitées sont prêtes pour le