Purification de protéines recombinantes à domaine P dérivées de bactéries de norovirus humains

Prenez une colonne de chromatographie d’exclusion stérique remplie de billes de gel sphériques poreuses.

Équilibrez la colonne avec un tampon qui préserve l’intégrité structurelle des protéines lors de la séparation.

Chargez un extrait bactérien purifié contenant des protéines du domaine P du norovirus humain exprimées de manière recombinante et des impuretés protéiques résiduelles.

Ajoutez le tampon pour faire circuler l’échantillon dans la colonne.

Les grosses impuretés résiduelles ne peuvent pas pénétrer dans les pores et passer à travers les espaces entre les billes, en s’échappant en premier.

Surveillez l’élution à l’aide de l’absorbance UV. Un petit pic indique que des impuretés sortent de la colonne.

En revanche, les petites protéines du domaine P pénètrent dans les pores des billes, parcourent un chemin plus long et éluent plus tard. Une augmentation du pic d’absorbance indique l’élution des protéines du domaine P.

Collectez les fractions éluées contenant les protéines du domaine P, qui sont maintenant prêtes pour une analyse plus approfondie.

Laver les pompes et les tuyaux du système de purification par chromatographie liquide haute performance, et pré-équilibrer la colonne de chr