Purification sélective d’une protéine bactérienne par chromatographie échangeuse d’ions négatifs
Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:28 min • October 30th, 2025
Commencer avec une solution de résine échangeuse d’ions contenant des groupes fonctionnels chargés positivement pour la liaison sélective des protéines.
Ensuite, prenez un extrait de protéine obtenu à partir de cellules bactériennes de l’hôte modifiées pour surexprimer un facteur de virulence de la bactérie pathogène Helicobacter pylori.
L’extrait contient le facteur de virulence cible ainsi que des protéines de la cellule hôte dans un tampon à pH 8.
Mélangez l’extrait de protéine avec la résine et incubez en agitant pour assurer une interaction protéine-résine uniforme.
Les protéines de l’hôte, ayant des points isoélectriques inférieurs au pH tampon, deviennent chargées négativement et se lient à la résine chargée positivement.
La protéine cible, avec un point isoélectrique proche du pH tampon, reste en grande partie non chargée et reste non liée.
Transférez la suspension protéine-résine dans une colonne de chromatographie et laissez la résine se déposer.
Recueillir la phase liquide contenant la protéine cible non liée.
Rincez la résine avec le tampon pour assurer une récupération maximale de la protéine cible.
Pour préparer 15 millilitres de résine DEAE, suspendez 0,6 gramme de poudre sèc
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