Procédure de purification d’une protéine marquée à la polyhistidine à partir de Streptococcus mutans

Prenez une culture de Streptococcus mutans exprimant une protéine marquée à la polyhistidine sécrétée dans le milieu.

Centrifugez la culture et collectez le surnageant riche en protéines.

Ajouter du sulfate d’ammonium et incuber en remuant pour précipiter les protéines en réduisant leur solubilité.

Transférez la solution dans un tube, centrifugez-le et jetez le surnageant.

Remettez la pastille en suspension dans un tampon de liaison contenant des sels et une faible teneur en imidazole pour stabiliser la protéine.

Dialysez la solution contre un tampon de liaison frais pour éliminer l’excès de sels.

Centrifugez la solution dialysée pour en faire des débris insolubles dans les pastilles, puis filtrez le surnageant.

Mélangez le filtrat avec de la résine d’affinité chargée de nickel et incubez pour permettre la liaison sélective de la protéine marquée à la polyhistidine aux ions nickel.

Chargez le mélange sur la colonne de chromatographie et lavez-le avec un tampon de liaison pour éliminer les protéines non liées.

Ensuite, ajoutez un tampon d’élution avec une teneur élevée en imidazole pour déplacer l’histidine des ions nickel et libérer la protéine marquée à la polyhistidine.

Récupérez cet éluat