Microscopie microfluidique time-lapse pour étudier la persistance des antibiotiques chez les bactéries

Commencez par des cellules bactériennes à croissance exponentielle exprimant une protéine de fusion de liaison à l’ADN marquée par fluorescence pour visualiser le nucléoïde.

Ajoutez les cellules aux entrées d’une plaque microfluidique pré-préparée.

Ensuite, introduisez des milieux contenant des antibiotiques et des milieux sans antibiotiques dans des entrées de solution séparées.

Scellez la plaque, montez-la sur la platine du microscope et lancez l’imagerie en accéléré.

Tout d’abord, chargez les cellules dans la chambre de culture.

Ensuite, perfuser un milieu sans antibiotique dans la chambre pour favoriser une croissance cellulaire exponentielle.

Enfin, introduisez le milieu contenant des antibiotiques.

L’antibiotique induit des cassures de l’ADN double brin, tuant les cellules sensibles. Ces cellules présentent des nucléoïdes compactés, non répliquants et à fluorescence stable.

Revenez à des milieux sans antibiotiques pour favoriser la guérison.

Les cellules persistantes - une petite sous-population qui survit au traitement antibiotique - reprennent la réplication de l’ADN, s’allongent et se divisent.

Cette récupération conduit à une fluorescence accrue dans les cellules persistantes, ce q