Génération d’une souche rapporteure fluorescente chez Pseudomonas aeruginosa

Commencez par une culture électrocompétente de Pseudomonas aeruginosa suspendue dans un tampon de saccharose à faible conductivité.

Ajouter un plasmide codant pour une protéine fluorescente verte (GFP) sous un promoteur cyclique di-GMP-responsive et un marqueur de résistance à l’ampicilline.

Mélangez et transférez la suspension dans une cuvette d’électroporation pré-refroidie.

Essuyez et insérez la cuvette dans un électroporateur.

Appliquez des impulsions électriques pour former des pores transitoires dans la membrane bactérienne. Cela facilite l’entrée du plasmide dans le cytoplasme.

Après l’électroporation, la membrane se referme, piégeant le plasmide à l’intérieur.

Retirez la cuvette, ajoutez du milieu frais, mélangez et transférez les bactéries dans un tube.

Incuber pour permettre à la bactérie d’exprimer le gène de résistance à l’ampicilline et la GFP.

Étalez la culture sur une plaque de gélose riche en nutriments complétée par de l’ampicilline et incubez. Les bactéries contenant le plasmide rapporteur se développent et forment des colonies.

Observez la plaque au microscope à fluorescence. La fluorescence verte confirme la génération réussie de la souche rapporteure fluorescente.

Ajoute