Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:15 min • October 30th, 2025
Prenez une plaque multi-puits contenant des bactéries pathogènes génétiquement modifiées cultivées avec différents composés d’essai, ainsi que des témoins négatifs.
Les bactéries portent un plasmide avec un gène codant pour la protéine fluorescente verte ou GFP.
Le promoteur du gène est activé par une protéine qui répond aux concentrations cycliques intracellulaires de di-GMP ou de c-di-GMP.
Placez la plaque dans un lecteur de plaques.
Utilisez la commande négative, qui émet une fluorescence maximale en raison de l’absence d’un inhibiteur c-di-GMP, pour ajuster les paramètres afin d’obtenir une mesure optimale du signal de fluorescence.
Si un composé testé inhibe la formation de c-di-GMP, le taux intracellulaire de c-di-GMP diminue.
La réduction des niveaux de c-di-GMP déclenche un changement de conformation de la protéine, entraînant une répression du promoteur et une faible expression de la GFP, ce qui entraîne une diminution de la fluorescence.
Mesurez la fluorescence et analysez les données pour identifier les composés d’essai qui modulent les niveaux intracellulaires de c-di-GMP chez les bactéries pathogènes.
Environ 30 minutes avant la mesure spectrophotométrique, préchauffez le lect
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