Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:07 min • October 30th, 2025
Prélever des échantillons séparés de cellules vivantes et mortes de Microcystis aeruginosa .
Mélangez les échantillons pour créer une population combinée.
Microcystis contient de la phycocyanine, un pigment autofluorescent qui reste intact dans les cellules vivantes mais se dégrade dans les cellules mortes.
Vortex l’échantillon pour briser les amas et générer une suspension uniforme à cellule unique.
Ajoutez une sonde fluorescente imperméable à la membrane cellulaire et liant les acides nucléiques, et incubez l’échantillon dans l’obscurité pour éviter le photoblanchiment.
La sonde pénètre sélectivement dans les cellules mortes à travers leurs membranes endommagées et se lie à l’ADN intracellulaire.
Passez l’échantillon à l’aide d’un cytomètre en flux pour mesurer l’autofluorescence de la phycocyanine et la fluorescence de la sonde d’acide nucléique à l’aide de lasers de longueur d’onde d’excitation appropriés.
Les cellules vivantes émettent une forte autofluorescence de la phycocyanine mais ne montrent aucun signal de sonde.
En revanche, les cellules mortes présentent une émission de pigment réduite et une fluorescence de sonde élevée, confirmant les dommages à la membrane.
Cela permet d’id
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