Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:37 min • October 30th, 2025
Prenez une culture de Lactococcus lactis exprimant la peptidase membranaire NisP.
Mélangez la culture avec un milieu riche en nutriments.
Ajouter l’agar-gélaire fondu, mélanger et verser dans une assiette pour répartir uniformément L. lactis dans l’agar.
Une fois solidifié, enfoncez les puits dans l’agar.
Ensuite, prenez E. coli recombinant produisant des variantes précurseurs de type sauvage ou modifiées du peptide antimicrobien nisine.
Centrifuger pour granuler les bactéries, jeter les surnageants et remettre les granulés en suspension dans le tampon.
Sonicate pour lyser les bactéries, centrifuger et transférer les surnageants dans des tubes frais.
Normalisez les lysats à une densité optique égale à l’aide d’un tampon pour garantir des niveaux de peptides constants.
Pipeter chaque échantillon dans des puits de gélose individuels et incuber les échantillons.
Au cours de l’incubation, les peptides précurseurs de la nisine se diffusent dans la gélose et sont clivés par la NisP, générant ainsi de la nisine mature.
La nisine mature inhibe la croissance de L. lactis , formant des halos clairs autour du puits.
Comparez les tailles de halo pour évaluer l’activité antimicrobienne des variantes de la
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