Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:48 min • October 30th, 2025
La fibrose kystique (FK) est une maladie génétique qui provoque une accumulation de mucus épais et collant dans les poumons, formant des expectorations qui favorisent la croissance microbienne pathogène.
Pour préparer des expectorations artificielles de FK, prenez des solutions aux propriétés biochimiques clés.
Le mélange de mucine contient des mucines, qui sont des glycoprotéines de haut poids moléculaire, pour reproduire la viscosité des expectorations de la mucoviscidose et favoriser l’adhésion microbienne.
Le mélange chimique fournit des ions et du glucose pour soutenir le métabolisme microbien.
Le mélange biologique fournit des nutriments pour la croissance microbienne.
Combinez le tout pour former le milieu d’expectoration artificielle (ASM).
Ajoutez un agent tampon pour maintenir un pH légèrement acide qui favorise la survie des agents pathogènes.
Pour une stérilisation moyenne, transférez l’ASM dans une chambre de filtration sous vide avec un filtre à membrane.
Filtrer sous agitation pour éviter l’agrégation de mucine et éviter le colmatage du filtre.
Le vide aspire le fluide à travers le filtre, éliminant les contaminants microbiens et les agrégats macromoléculaires.
L’ASM est prêt pour la culture de microbes associés à la fibrose kystique.
Préparez un milieu d’expectoration artificiel en ajoutant 250 millilitres d’ASCM dans la bouteille de 1 litre contenant de l’ASMM. Ensuite, ajoutez 250 millilitres d’ASBM dans la bouteille moyenne. Titrez le milieu avec un tampon MOPS basique de 1 molaire pour atteindre un pH de 6,3 sur un papier pH.
Réfrigérer le milieu d’expectoration artificielle à 4 degrés Celsius jusqu’à la filtration. Ensuite, pour démarrer le processus de filtration, transférez 200 millilitres de milieu d’expectoration artificiel non filtré dans un système de filtration sous vide avec un filtre de taille de pores de 0,22 micromètre. Après avoir connecté le système de filtration à la pompe à vide, allumez la pompe à vide. Ensuite, placez la chambre sur un agitateur orbital, en l’agitant à 90 rotations par minute dans une pièce froide à 4 degrés Celsius.
Changez le filtre après que 350 millilitres de fluide ont été filtrés pour surmonter le problème de colmatage. Une fois qu’une quantité considérable est filtrée, ajoutez un milieu supplémentaire de 150 millilitres pour la filtration. Répétez la filtration avec des chambres supplémentaires jusqu’à ce que tout le média soit filtré.