Traitement de bactéries avec des exsudats racinaires de plantes pour imiter in vitro les interactions plantes-microbes

Prenez une culture mère de Bacillus m ycoides, une rhizobactérie favorisant la croissance des plantes, et étalez un inoculum sur une plaque de culture.

Incuber la plaque pour favoriser la prolifération bactérienne en colonies.

Inoculer une seule colonie dans un milieu liquide et incuber en agitant pour favoriser la croissance bactérienne.

Diluer la culture à l’aide du milieu liquide pour obtenir la densité optimale pour le dosage.

Ajoutez des exsudats de racine de pomme de terre à la culture pour imiter les interactions plantes-microbes.

Incuber la culture avec agitation, facilitant l’interaction des molécules de signalisation avec les récepteurs bactériens.

Cette interaction induit des voies de signalisation qui activent des protéines régulatrices, qui se lient à l’ADN et modifient l’expression des gènes.

Transférez la culture dans un tube et faites tourner les cellules bactériennes en une pastille.

Jetez le surnageant et trempez le tube dans de l’azote liquide pour congeler les cellules.

Stockez les cellules pour analyser les changements induits par l’exsudat des racines des plantes dans l’expression des gènes bactériens.

Pour faire croître les bactéries, striez une souche de B. mycoides d’un stock de glycérol de moins 80 degrés Celsius sur une plaque de gélose LB, et incubez la plaque à 30 degrés Celsius pendant la nuit. Ensuite, inoculez le milieu liquide LB avec une seule colonie de la plaque et cultivez la culture dans un incubateur à agitation à 200 tr/min pendant la nuit à 30 degrés Celsius.

Pour traiter et échantillonner les bactéries, diluez une culture de B. mycoides pendant la nuit avec 90 millilitres de milieu LB préchauffé jusqu’à la DO initiale₆₀₀ de zéro virgule zéro cinq dans une fiole de 300 millilitres. Par la suite, ajoutez 10 millilitres d’exsudats racinaires à la culture et utilisez un traitement à l’eau stérile et désionisée de 10 millilitres comme contrôle. Ensuite, incubez-les à 30 degrés Celsius pendant une heure.

Au bout d’une heure, transférez la culture dans des tubes à centrifuger de 50 millilitres. Prélever les cellules de la culture par centrifugation à 9 000 fois G pendant deux minutes à quatre degrés Celsius. Ensuite, jetez le surnageant et congelez immédiatement la pastille dans de l’azote liquide.

Ensuite, conservez-le à moins 80 degrés Celsius jusqu’à utilisation.