Essai de croissance bactérienne limitée aux métaux pour étudier le rôle des gènes sensibles aux métaux

Prenez les bactéries de type sauvage et les bactéries mutantes qui n’ont pas de gène spécifique sensible aux métaux présent dans le type sauvage.

Les bactéries sont cultivées dans des milieux appauvris en métal pour épuiser leurs réserves internes de métal.

Dans cet environnement appauvri en métaux, le gène sensible aux métaux chez les bactéries de type sauvage est activé et exprime un récepteur de surface, qui est absent chez les bactéries mutantes.

Diluez les cultures pour assurer une densité cellulaire uniforme.

Prenez une plaque multipuits contenant un complexe métal-protéine.

Ajouter les cultures diluées dans les puits.

Incuber la plaque à l’intérieur d’un lecteur de plaques maintenu à une température contrôlée avec agitation pour favoriser une croissance bactérienne optimale.

Mesurez l’absorbance à intervalles réguliers pour surveiller la croissance bactérienne au fil du temps.

Chez les bactéries de type sauvage, le récepteur métallique permet l’extraction de l’ion métallique du complexe, favorisant ainsi sa croissance.

Les bactéries mutantes présentent une croissance limitée car elles ne parviennent pas à extraire l’ion métallique du complexe sans les récepteurs métalliques.

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