JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologie
0 vues • 2:17 min • October 30th, 2025
Commençons par une souris euthanasiée dont la trachée est exposée. Les poumons de la souris ont été pré-infectés par Haemophilus influenzae, une bactérie pathogène non typable.
Insérez un cathéter dans la trachée et fixez-le à une seringue remplie de tampon de lavage.
Administrez le tampon de lavage contenant un anticoagulant pour prévenir la formation de caillots sanguins et un sucre pour préserver l’intégrité cellulaire.
Aspirez doucement pour récupérer le liquide de lavage broncho-alvéolaire contenant les globules rouges, les cellules immunitaires et les agents pathogènes résiduels.
Répétez la procédure et regroupez le liquide de lavage récupéré en une seule suspension.
Prélever une aliquote de la suspension accumulée et centrifuger pour séparer les cellules. Jetez le surnageant.
Remettre les cellules en suspension dans un tampon de lyse pour lyser sélectivement les globules rouges.
Centrifuger pour séparer les cellules restantes et jeter le surnageant contenant des débris.
Suspendez à nouveau les cellules restantes dans une mémoire tampon.
La suspension finale, contenant des cellules immunitaires et des bactéries résiduelles, est prête pour l’analyse en aval.
Exposez la partie ventrale du poumon pour accéder à la trachée. Intubez la trachée avec un cathéter de calibre 20.
À l’aide du cathéter, instillez 0,8 millilitre de tampon BALF et collectez le lavage par aspiration dentaire. Répétez cette procédure trois fois de plus, en regroupant les quatre collections de lavage en une seule suspension.
Prenez une aliquote de 100 microlitres et tournez-la pendant deux minutes à 2 000 tr/min.
Retirer le surnageant et le remettre en suspension dans le tampon de lyse des globules rouges. Faites-le tourner et remettez le granulé en suspension avec 1X PBS.