Synchronisation des cultures cyanobactériennes et compactage de l’ADN pilotés par des cycles lumière-obscurité

0 vues3:17 min • October 30th, 2025

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Commencez par une plaque de gélose riche en nutriments complétée par du thiosulfate.

Striez les cyanobactéries et incubez sous des périodes alternées de lumière et d’obscurité pour maintenir le cycle circadien.

Pendant la période de lumière, l’absorption des nutriments et le thiosulfate favorisent la croissance bactérienne et la condensation de l’ADN.

Pendant la période sombre, les cellules conservent leur énergie et se divisent.

Le cycle alterné lumière-obscurité synchronise les cellules au même stade de croissance et de division.

Après la période de lumière, ajoutez une solution de saccharose et pipetez à plusieurs reprises pour libérer les cyanobactéries, provoquant un changement de couleur. Transférez les cellules dans un tube.

Ajoutez un colorant fluorescent spécifique à l’ADN et incubez dans l’obscurité. Le colorant se lie à l’ADN cyanobactérien.

Centrifugeuse pour séparer les cyanobactéries et éliminer le surnageant.

Remettez les cyanobactéries en suspension dans une solution de saccharose, transférez la suspension sur une lame et couvrez-la.

Au microscope à fluorescence, l’ADN condensé bleu dans les cellules confirme la progression synchronisée et circadienne du cycle cellulaire cyanobactérien.

Commencez par cultiver des cyanobactéries sur des plaques BG-11 stérilisées de neuf centimètres contenant 1,5 % de gélose et 0,3 % de thiosulfate de sodium. Incuber les plaques à 23 degrés Celsius sous un cycle de lumière de 12-12 avec 50 micro-E de lumière par mètre carré et par seconde. Pour conserver les cellules, transférez-les chaque semaine sur des plaques de gélose BG-11 fraîches.

En l’espace d’une semaine, les cultures apparaissent sous forme de bandes vertes. Transférez les amas verts de cellules à l’aide d’une boucle stérilisée à la flamme et faites-les strier sur la nouvelle plaque. Pour observer le compactage de l’ADN, prélevez les cellules cultivées pendant six jours à la fin de la période lumineuse.

Pour libérer les cellules de la plaque, ajoutez un millilitre de saccharose 0,2 molaire. Ensuite, récupérez la suspension cellulaire et répétez l’ajout et le retrait du saccharose jusqu’à ce que la solution devienne verte. Le changement de couleur indique que la plupart des cellules ont été libérées.

Maintenant, transférez 500 microlitres de solution de cellules en suspension dans un tube Microfuge et ajoutez une coloration Hoechst pour une concentration finale d’un microgramme par millilitre. Ensuite, laissez les cellules incuber dans l’obscurité pendant 10 minutes. Ensuite, faites tourner les cellules, jetez le surnageant et mettez-les en suspension dans 10 microlitres de saccharose de 0,2 molaire.

Ensuite, transférez un microlitre de suspension sur une lame de verre, mettez une lamelle et observez les cellules sous un microscope à fluorescence équipé d’un filtre UV. À l’aide d’un objectif d’immersion dans l’huile 100 fois, recherchez des preuves de compaction de l’ADN, qui devraient être observables dans la plupart des cellules.

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Dernière mise à jour : 22 août 2026