Purification par gradient de densité des plastoglobules cyanobactériens

Les plastoglobules sont des gouttelettes riches en lipides dans le cytoplasme des cyanobactéries.

Ils stockent des lipides neutres dans un noyau hydrophobe, entouré d’une monocouche lipidique amphipathique avec des protéines structurelles et enzymatiques intégrées. Les lipides stockés sont mobilisés pendant le stress pour soutenir les fonctions cellulaires.

Pour les isoler, commencez par une fraction grossière de plastoglobule obtenue à partir de cyanobactéries. Cette fraction est enrichie en plastoglobules et comprend des protéines contaminantes résiduelles.

Mélangez cette fraction avec une solution de saccharose plus dense et transférez-la dans un tube d’ultracentrifugation.

Superposer avec une solution de saccharose plus légère pour créer un gradient de densité discontinu.

Centrifugeuse à grande vitesse dans des conditions froides pour éviter la dégradation thermique des plastoglobules.

Le gradient sépare les composants par densité : les plastoglobules riches en lipides et à faible densité flottent vers le haut, tandis que les contaminants plus denses et riches en protéines coulent.

Récupérez les plastoglobules purifiés et congelez-les dans un milieu de congélation pour préserver leur structure.

Conserver à des températures ultra-basses pour une utilisation à long terme.

Pour récolter des plastoglobules purs à partir de cyanobactéries, créez un gradient de saccharose, comme mentionné précédemment, en utilisant 500 microlitres de plastoglobules bruts, 750 microlitres de R 0,7 et 750 microlitres de R 0,2. Après la centrifugation, recueillir les plastoglobules purs dans un tube de 1,5 millilitre et aliquote les plastoglobules purs. Une fois cela fait, congelez les aliquotes de plastoglobules purs dans de l’azote liquide et stockez-les directement à moins 80 degrés Celsius ou lyophilisez-les en une poudre sèche.