Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:03 min • October 30th, 2025
Commencer par une culture de Legionella pneumophila, une bactérie pathogène.
Ces cellules bactériennes possèdent un système de sécrétion sur leur membrane, ce qui est essentiel pour l’infection de l’hôte.
Mettez les cellules bactériennes en suspension dans de l’eau stérile pour obtenir la densité requise pour l’imagerie par tomographie électronique cryogénique (cryo-ET).
Ajoutez des nanoparticules d’or, qui servent de points de référence pour l’alignement de l’image lors de la reconstruction tridimensionnelle.
Prenez une grille avec un film de carbone perforé pour déposer l’échantillon bactérien.
Placez la grille à l’intérieur d’une chambre remplie de gaz et appliquez une décharge électrique pour rendre la surface plus hydrophile.
Appliquez la suspension sur la grille, permettant au liquide de se répartir uniformément sur la surface et aux cellules de se déposer.
Retirez l’excès d’eau de la grille et plongez-la dans un milieu de congélation liquide pour congeler l’échantillon et préserver son architecture cellulaire.
L’échantillon est maintenant prêt pour l’imagerie cryo-ET du système de sécrétion bactérienne.
Pour préparer l’échantillon de cryotomographie électronique, faites pousser une é
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