Culture de la bactérie Vibrio natriegens à croissance rapide

Prenez un tube contenant une culture de Vibrio natriegens, une bactérie à croissance rapide.

Centrifugez la culture pour granuler les bactéries. Jetez le surnageant contenant le milieu résiduel.

Remettre la pastille bactérienne en suspension dans un milieu frais et la transférer dans une fiole conique contenant le même milieu pour la préparation de la culture bactérienne.

Incuber la culture en l’agitant dans des conditions aérées.

En raison d’une courte durée de génération, Vibrio natriegens utilise des nutriments et se divise rapidement pour générer une population bactérienne concentrée.

À l’aide d’un spectrophotomètre, surveillez régulièrement la densité optique (DO) pour déterminer la concentration bactérienne.

Cultivez la culture jusqu’à ce que la DO atteigne environ un, indiquant une phase de croissance exponentielle avec une activité métabolique élevée.

Transférez la culture dans des tubes à centrifuger.

Centrifugeuse à basse température pour séparer les bactéries tout en préservant l’intégrité cellulaire.

Placez le tube sur de la glace et retirez le surnageant contenant les débris cellulaires.

Stockez la pastille bactérienne à très basse température pour l’analyse en aval.

Pour commencer, lavez un millilitre de la culture de Vibrio natriegens pendant la nuit en la centrifugant dans une centrifugeuse de paillasse à 10 600 fois g pendant une minute.

Aspirez le surnageant sans perturber la pastille et mettez-le en suspension dans un millilitre de milieu LB-V2 frais. Inoculer un millilitre de culture de nuit lavée dans un litre de milieu de croissance frais LB-V2 dans un erlenmeyer autoclavé de 4 litres avec couvercle stérile pour obtenir un taux de dilution de un à mille. Cultivez la culture à 30 degrés Celsius tout en secouant à 225 tr/min.

À l’aide d’un spectrophotomètre, on surveille la DO 600 de la culture, et lorsqu’elle atteint 1,0 plus ou moins 0,2, on récolte la culture en la centrifugent dans deux tubes de 500 millilitres à 3 500 fois g pendant 20 minutes à quatre degrés Celsius, puis on la place sur de la glace. Aspirez le surnageant et traitez immédiatement le granulé.