Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:58 min • October 30th, 2025
Prenez une suspension de Vibrio natriegens, qui a un taux de synthèse des protéines élevé, dans un tampon réfrigéré pour éviter la dégradation cellulaire.
Centrifugeuse par temps froid.
Jetez le surnageant pour éliminer les contaminants.
Remettez le granulé en suspension dans un petit volume de tampon réfrigéré.
À l’aide d’une pointe à alésage large, transférez la suspension dans un tube de microcentrifugation pour éviter le cisaillement mécanique.
Mélangez la suspension et placez le tube dans un support positionné sur de la glace.
Abaissez l’embout du sonicateur dans la suspension.
Initier la sonication pour perturber la membrane cellulaire et libérer le contenu cytoplasmique.
Centrifugeuse pour séparer les débris cellulaires insolubles.
Recueillir l’extrait cellulaire surnageant ou brut contenant le contenu cytoplasmique dans un tube frais.
Congelez rapidement l’extrait cellulaire dans de l’azote liquide pour préserver sa bioactivité.
Stocker à des températures ultra-basses pour une utilisation ultérieure dans l’expression des protéines acellulaires.
Refroidissez le tampon de lyse S30 fraîchement préparé à un pH de 7,7 à environ quatre degrés Celsius, utilisez 10 millilitres de ce tampon de
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques