Expression de protéines acellulaires à l’aide d’un extrait de cellules brutes bactériennes
Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:32 min • October 30th, 2025
Un système d’expression de protéines acellulaires utilise un lysat de cellules brutes bactériennes, qui contient la machinerie moléculaire essentielle à la transcription et à la traduction in vitro.
Ce lysat comprend des facteurs de transcription, des ribosomes et des ARN de transfert (ARNt).
Ajoutez au lysat un mélange contenant une matrice d’ADN, l’ARN polymérase, des nucléotides et des acides aminés.
Transférez-le sur une plaque PCR et centrifugez-le pour recueillir le liquide collé aux parois. Scellez la plaque pour éviter l’évaporation.
Incuber dans un thermocycleur à une température optimale pour favoriser l’expression des protéines acellulaires.
Le facteur de transcription s’associe à l’ARN polymérase pour former un complexe qui se lie à l’ADN matrice.
Ce complexe catalyse la synthèse de l’ARN, incorporant des nucléotides pour générer un ARN messager (ARNm).
L’ARNm recrute des ribosomes, qui initient la traduction, au cours de laquelle les ARNt délivrent les acides aminés correspondants pour former une chaîne polypeptidique.
Le polypeptide se replie en une protéine fonctionnelle, prête pour les applications en aval.
Pour effectuer l’expression de protéines acellulaires à l’aide d’un
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