Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:20 min • October 30th, 2025
Commencez par une chambre de culture de microgouttelettes contenant une puce microfluidique avec des connecteurs contrôlés par pompe pour l’écoulement des fluides et l’élimination des déchets.
Placez une bouteille de réactif contenant une suspension bactérienne recouverte d’huile à l’intérieur de la chambre.
Connectez le tube supérieur de la bouteille à un port de pompe et le tube latéral à un connecteur à puce. Fermez la chambre.
Définissez les paramètres de la courbe de croissance. Ensuite, lancez la génération de gouttelettes.
Lorsque l’huile et la suspension bactérienne convergent au niveau de la jonction en T, le cisaillement de l’huile brise la phase bactérienne aqueuse en microgouttelettes uniformes encapsulant les bactéries.
Après la génération de gouttelettes, retirez la bouteille, connectez le connecteur à puce à l’orifice de la pompe et fermez la chambre.
Lorsque chaque gouttelette passe dans le chemin de détection, une sonde à fibre optique mesure sa densité optique, représentant la concentration bactérienne.
Déplacez les microgouttelettes d’avant en arrière pour permettre la croissance bactérienne.
Au fil du temps, la fibre optique mesure la densité optique de la gouttelette, générant une courbe de croissance.
À l’aide d’une seringue stérile de 10 millilitres, injectez trois à cinq millilitres d’huile MMC de l’aiguille de la seringue vers le tube latéral dans le flacon de réactif. Ensuite, inclinez et tournez lentement la bouteille de réactif pour que l’huile s’infiltre complètement dans la paroi intérieure.
Après avoir injecté cinq millilitres d’une solution bactérienne initiale dans le flacon, remplissez le flacon de réactif en injectant cinq à sept millilitres d’huile MMC. Retirez le connecteur rapide indépendant A de la bouteille de réactif et insérez le connecteur rapide A dans le connecteur rapide B de la bouteille pour terminer l’opération d’injection d’échantillon. Une fois cela fait, ouvrez la porte de la chambre d’opération pour mettre le flacon de réactif dans le bain métallique.
Retirez le connecteur C2 de la puce et le connecteur rapide A de la bouteille de réactif. Connectez le connecteur du tube latéral de la bouteille de réactif au connecteur C2 et le connecteur du tube supérieur au connecteur O2. Ensuite, fermez la porte de la chambre d’opération.
Pour choisir la fonction de mesure de la courbe de croissance, cliquez sur Courbe de croissance. Dans l’interface de paramétrage, saisissez le nombre 15. Ensuite, activez le commutateur de détection OD et réglez la longueur d’onde sur 600 nanomètres. Cliquez sur l’onglet Démarrer pour lancer la génération de droplets.
Le processus prendra 15 minutes.
Lorsqu’une fenêtre contextuelle apparaît sur l’interface principale et vous invite à afficher un message, ouvrez la porte de la chambre d’opération pour sortir le flacon de réactif et connecter les connecteurs C2 et O2. Après avoir fermé la porte, cliquez sur le bouton OK dans la fenêtre contextuelle pour cultiver automatiquement les gouttelettes et détecter les valeurs OD.
Lorsque la courbe de croissance atteint la phase stationnaire, cliquez sur le bouton Exportation de données pour exporter les données OD. Sélectionnez le chemin d’enregistrement des données et exportez la valeur OD enregistrée pendant la période de culture au format point CVS. Pour tracer la courbe de croissance, utilisez un logiciel de cartographie tel qu’Excel et Origin 9.0.