Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 4:37 min • October 30th, 2025
Prenez une culture de Phormidium lacuna, une cyanobactérie filamenteuse.
Homogénéiser la culture pour disperser les filaments, puis centrifuger pour granuler les bactéries.
Jetez le surnageant et remettez la pastille en suspension dans un milieu riche en nutriments.
Ajoutez de l’ADN plasmidique contenant de la protéine fluorescente verte et des gènes de résistance aux antibiotiques sur une plaque de gélose supplémentée en antibiotiques.
Ajoutez la suspension bactérienne sur l’ADN et incubez dans des conditions de lumière.
Les bactéries internalisent l’ADN à l’aide de pili de type IV. Les gènes introduits s’intègrent dans l’une des multiples copies du génome bactérien.
Redistribuez les bactéries sur une plaque de gélose enrichie en antibiotiques pour sélectionner les bactéries transformées.
Au microscope optique, identifiez les filaments sains et verts indiquant une transformation réussie.
Transférez les filaments sélectionnés dans un milieu liquide avec une concentration d’antibiotiques plus élevée pour enrichir la population transformée.
Encore une fois, placez-les sur de la gélose avec des niveaux d’antibiotiques plus élevés pour séparer les transformants.
Visualisez l’expression de la GFP
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques