Motilité de glissement chez les filaments de Phormidium lacuna

Commencer par une culture de filaments de Phormidium lacuna .

Homogénéiser brièvement la culture pour briser les grappes de filaments et générer une suspension uniforme.

Transférez l’échantillon homogénéisé sur une plaque de Pétri et laissez-le reposer.

Recouvrez la plaque de cellophane pour réduire l’évaporation.

Placez une lame sur la platine du microscope pour servir de plate-forme de support.

Positionnez la plaque contenant l’échantillon directement sur le dessus de la lame.

Utilisez une lentille d’objectif de faible puissance et concentrez-vous sur les filaments bactériens en suspension dans le milieu pour observer leur mouvement.

Les filaments présentent un mouvement lent et glissant sur la surface, entraîné par les pili de type IV, les fibres microscopiques assemblées au niveau de la membrane interne et émergeant à travers la membrane externe.

Ces fibres s’étendent et se rétractent pour tirer les cellules vers l’avant, leur permettant de glisser.

Ce test révèle la motilité de glissement caractéristique de Phormidium lacuna dans un environnement liquide.

Cultiver P. lacuna dans un milieu F2 sous 50 tr/min, en agitation horizontale en lumière blanche pendant environ cinq jours jusqu’à ce que la densité optique estimée à 750 nanomètres devienne 0,35. Conservez l’échantillon à quatre degrés Celsius. Homogénéiser les filaments avec des ultrasons pendant une minute à puissance maximale et cycle d’un.

Mesurez la densité optique à 750 nanomètres et transférez huit millilitres du milieu contenant P. lacuna dans une boîte de Pétri de six centimètres. Attendez quelques minutes jusqu’à ce que l’échantillon atteigne la température ambiante, puis couvrez la boîte de Pétri d’une feuille de cellophane. Placez une lame de microscope sur la table X-Y d’un microscope standard avec une caméra.

Allumez la lumière du microscope et déplacez un objectif 4X ou 10X sur la trajectoire de la lumière. Ensuite, placez la boîte de Pétri sur le dessus de la lame. Ajustez les filaments simples ou les faisceaux de filaments par les mouvements X, Y et Z de la table.

Observez les mouvements de filaments simples ou de faisceaux et enregistrez les mouvements avec une caméra de microscope standard. Assurez-vous que la lentille de l’objectif ne touche pas le liquide.