Génération de mutants marqués aux antibiotiques chez les cyanobactéries par recombinaison homologue

Commencez par une culture de cyanobactéries.

Centrifugez la culture, puis lavez doucement la pastille pour préserver les pili de surface bactérienne.

Centrifugez à nouveau, remettez la pastille en suspension dans un milieu frais et transférez-la dans un tube.

Introduire un vecteur non réplicatif avec un gène de résistance aux antibiotiques. Ce gène est flanqué de séquences d’ADN homologues à des régions situées en amont et en aval d’un gène cible dans le génome bactérien.

Incuber pour permettre l’internalisation du plasmide médiée par les pili, qui s’aligne avec les séquences homologues et remplace le gène cible par recombinaison, introduisant ainsi une mutation.

Répartissez les cellules sur gélose et incubez, permettant au gène de résistance aux antibiotiques d’exprimer une protéine de résistance.

Recouvrir la surface de la gélose avec de la gélose contenant un antibiotique et incuber. La protéine de résistance dans les cellules mutantes inactive l’antibiotique, facilitant leur survie et la formation de colonies.

Choisissez les colonies survivantes et refaites une nouvelle traînée sur de la gélose contenant un antibiotique pour séparer les mutants résistants aux antibiotiques.

Après avoir